Discover, Mars 6, Discover SP-D

A hidrólise de proteínas é um procedimento de digestão de proteínas e péptidos, testado e comprovado desde os anos 50 (Stein e Moore), para análise de aminoácidos. A análise de aminoácidos (AAA) é utilizada para quantificar os aminoácidos individuais da respectiva amostra e é um pré-requisito para identificar a sequência de aminoácidos da proteína/peptídeo.

A etapa de hidrólise é normalmente efectuada a uma temperatura de 110 °C com ácido clorídrico 6N e cliva todas as ligações entre os aminoácidos individuais da proteína/peptídeo a analisar. Esta etapa é muito morosa e demora normalmente 20 a 24 horas. Além disso, são criadas condições de reação inertes para que o oxigénio do ar não possa reagir com os aminoácidos. Esta etapa de hidrólise pode ser efectuada na fase gasosa para obter limites de deteção baixos, especialmente para pequenas quantidades de amostra (500 picomoles/100 µg). Quantidades maiores de amostras são frequentemente processadas em contacto direto com ácido clorídrico (hidrólise em fase líquida).

Com a ajuda da hidrólise de proteínas assistida por micro-ondas, a hidrólise líquida no Mars 6 ou no Discover SP-D, bem como a hidrólise em fase gasosa no Discover, podem ser efectuadas rápida e suavemente.

Tecnologias de hidrólise

Hidrólise em fase gasosa

A tecnologia de micro-ondas pode ser utilizada para obter uma série de vantagens neste processo estabelecido:

1. O tempo poupado pela utilização da tecnologia de micro-ondas também é enorme na hidrólise de proteínas. Em vez de executar as reacções de decomposição durante a noite, o micro-ondas pode alcançar resultados comparáveis em apenas 15 minutos.
2. A eficiência da digestão é aumentada. A digestão de proteínas hidrofóbicas, em particular, foi significativamente melhorada com a ativação por micro-ondas.
3. Podem ser utilizados até 10 frascos padrão do amostrador automático de HPLC (100 - 300 µl) numa corrida. A cada 15 minutos, 10 amostras podem ser hidrolisadas novamente e, assim, é possível obter um rendimento de amostra extremamente elevado.

Hidrólise líquida

A hidrólise de proteínas é utilizada para clivar todos os compostos peptídicos de uma cadeia proteica. Os aminoácidos livres resultantes são quantificados através da análise de aminoácidos. As proteínas são isoladas de organismos vivos (bioquímica, biotecnologia...), de alimentos para consumo humano e animal (lacticínios, produtos à base de carne e salsichas, cervejarias e indústria de bebidas) ou de sangue e urina para fins de diagnóstico. A hidrólise de proteínas com suporte de micro-ondas no MARS 6 e Discover permite a clivagem rápida e reprodutível de cadeias de péptidos ou proteínas. O tempo de hidrólise pode ser reduzido de várias horas para minutos. Além disso, o equipamento necessário para a hidrólise por micro-ondas é menos complexo do que na técnica clássica.