Discover, Mars 6, Discover SP-D

L'idrolisi proteica è una procedura di digestione di proteine e peptidi collaudata dagli anni '50 (Stein e Moore) per l'analisi degli aminoacidi. L'analisi degli aminoacidi (AAA) viene utilizzata per quantificare i singoli aminoacidi del rispettivo campione ed è un prerequisito per identificare la sequenza aminoacidica della proteina/peptide.

La fase di idrolisi viene tipicamente eseguita a una temperatura di 110 °C con un acido cloridrico 6N e scinde tutti i legami tra i singoli aminoacidi della proteina/peptide da analizzare. Questa fase richiede molto tempo e in genere da 20 a 24 ore. Inoltre, è necessario creare condizioni di reazione inerti, in modo che l'ossigeno presente nell'aria non possa reagire con gli aminoacidi. Questa fase di idrolisi può essere eseguita in fase gassosa per ottenere bassi limiti di rilevazione, soprattutto per piccole quantità di campione (500 picomoli/100 µg). Quantità maggiori di campione vengono spesso processate a diretto contatto con l'acido cloridrico (idrolisi in fase liquida).

Con l'aiuto dell'idrolisi proteica assistita da microonde, l'idrolisi liquida nel Mars 6 o nel Discover SP-D e l'idrolisi in fase gassosa nel Discover possono essere effettuate in modo rapido e delicato.

Tecnologie di idrolisi

Idrolisi in fase gassosa

Con l'aiuto della tecnologia a microonde, è possibile ottenere una serie di vantaggi in questo processo consolidato:

1. Il tempo risparmiato utilizzando la tecnologia a microonde è enorme anche nell'idrolisi delle proteine. Invece di eseguire le reazioni di decomposizione per tutta la notte, le microonde possono ottenere risultati comparabili in soli 15 minuti.
2. L'efficienza della digestione è aumentata. La digestione delle proteine idrofobiche, in particolare, è stata notevolmente migliorata con l'attivazione a microonde.
3. È possibile utilizzare fino a 10 fiale autocampionatrici HPLC standard (100 - 300 µl) in una corsa. Ogni 15 minuti è possibile idrolizzare nuovamente 10 campioni, ottenendo così una produttività estremamente elevata.

Idrolisi liquida

L'idrolisi delle proteine viene utilizzata per scindere tutti i composti peptidici di una catena proteica. Gli aminoacidi liberi risultanti vengono quantificati mediante l'analisi degli aminoacidi. Le proteine vengono isolate da organismi viventi (biochimica, biotecnologia...), da alimenti e mangimi (caseifici, prodotti a base di carne e insaccati, birrerie e industria delle bevande) o da sangue e urine per scopi diagnostici. L'idrolisi delle proteine con il supporto delle microonde nei sistemi MARS 6 e Discover consente una scissione rapida e riproducibile delle catene peptidiche o proteiche. Il tempo di idrolisi può essere ridotto da diverse ore a pochi minuti. Inoltre, l'attrezzatura necessaria per l'idrolisi a microonde è inferiore rispetto alla tecnica classica.