O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid

Vorlage:DISPLAYTITLE:o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid

o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid (ONPG) ist ein artifizielles, chromogenes Substrat für das Enzym β-Galactosidase (LacZ).

Weiteres empfehlenswertes Fachwissen

Lassen Sie sich von statischen Aufladungen nicht die Wägegenauigkeit stören.

Wie erhalten Sie Tag für Tag genaue Wägeresultate?

Wie kann man Pipetten schnell überprüfen?

Eigenschaften

Das Enzyms β-Galactosidase hydrolysiert ONPG zu Galactose und dem gelben Farbstoff o-Nitrophenol.

Verwendung

In der Biochemie wird ONPG zur quantitativen Bestimmung der Aktivität der β-Galactosidase verwendet.

Das natürliche Substrat der β-Galaktosidase ist das Disaccharid Laktose. Ähnlich wie X-Gal, das für die qualitative β-Galaktosidasebestimmung verwendet wird, ist ONPG ist Laktosederivat, das für die β-Galaktosidase ein chromogenes Substrat darstellt.

In einem Reaktionsansatz entstehen nach der hydrolytischen Spaltung des farblosen ONPG Galaktose und das gelbgefärbte o-Nitrophenol. Das ONPG muss im Überschuss im Ansatz vorhanden sein. Die Intensität der Gelbfärbung variiert mit der Konzentration der β-Galaktosidase und der Reaktionsdauer. Durch Zugabe von Natriumcarbonat (Verschiebung des pH-Werts in den basischen Bereich (pH 11)) wird die Reaktion abgestoppt, da β-Galaktosidase bei hohen pH-Werten inaktiv ist. Die mit bloßem Auge sichtbare Gelbfärbung sollte nicht zu intensiv sein und sich zwischen 15 Minuten und sechs Stunden nach Reaktionsstart bilden.

Die Menge des entstandenen o-Nitrophenols wird durch Absorption in einem Photometer bei 420 nm bestimmt. Aus der Reaktionsdauer und dem Absorptionswert kann die Aktivität der β-Galaktosidase berechnet werden.

Literatur

J.H. Miller Assay of β-Galactosidase, In J.H. Miller Experiments in Molecular Genetics, S. 352–355, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1972, ISBN 0-87969-106-9

Siehe auch

• X-Gal