Klenow-Fragment

Als Klenow-Fragment wird die größere der beiden Untereinheiten der DNA-Polymerase I von Escherichia coli bezeichnet. Es wurde nach seinem Entdecker, dem dänischen Biochemiker Hans Klenow benannt.

Weiteres empfehlenswertes Fachwissen

Tägliche Sichtkontrolle der Laborwaagen

Sicherer Wägebereich zur Sicherstellung genauer Resultate

Dauerhaft genaue Prüfgewichte dank 12 kostenloser Tipps

Es verfügt über zwei unterschiedliche enzymatische Funktionen.

• eine 5'-3'-Polymerase-Funktion, also den Einbau von Nukleotiden in einen neuen DNA-Strang, wobei einzelstränge DNA als Template vorliegt
• eine 3'-5'-Exonuclease-Aktivität.

Das Klenow-Fragment wird in der Biochemie und Molekularbiologie bei Klonierungsexperimenten für verschiedene Zwecke verwendet:

• Synthese von doppelsträngiger DNA (Polymerasefunktion)

Diese Aktivität wird für die Herstellung markierter DNA durch Nick translation oder Random priming für weitere Versuche, z. B. Southern-Blots (Polymerasefunktion) genutzt.

• Auffüllen von 5'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Polymerasefunktion)
• Abbau von 3'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Exonukleasefunktion)

Diese Aktivitäten dienen zur Herstellung von sogenannten blunt ends, die mittels T4-Ligase verbunden werden können.