Double Digest Problem

Das Double-Digest-Problem ist eine Formulierung des Problems, eine physikalische Karte mit Hilfe von Restriktionsenzymen zu erzeugen. Die Idee dabei ist, zwei verschiedene Restriktionsenzyme RE1 und RE2 zu benutzen, die an verschiedenen Erkennungssequenzen schneiden. Dazu wird zunächst die zu untersuchende DNA mehrfach kopiert und darauf dann drei Reaktionen durchgeführt:

1. vollständige Verdauung mit Restriktionsenzym RE1
2. vollständige Verdauung mit Restriktionsenzym RE2
3. vollständige Verdauung mit beiden Restriktionsenzymen RE1 und RE2

Weiteres empfehlenswertes Fachwissen

Tägliche Sichtkontrolle der Laborwaagen

Leitfaden zu den grundlegenden Laborkenntnissen

Wie erhalten Sie Tag für Tag genaue Wägeresultate?

Die gewonnenen DNA-Fragmente werden anschließend z.B. mit Hilfe einer Gelelektrophorese aufgetrennt und damit die verschiedenen Fragmentlängen gewonnen. Dabei entstehen also drei Fragmentlängen-Mengen ΔRE1, ΔRE2 und ΔRE1RE2. Die Aufgabe ist es dann, aus diesen Mengen die Schnittpositionen der Restriktionsenzyme abzuleiten. Da man die Erkennungssequenzen der benutzten Restriktionsenzyme kennt, hat man damit Positionen auf der Sequenz eindeutig identifiziert.

Beispiel:

(die Schnittstellen sind mit * markiert, die DNA-Sequenz hat die Länge 15kb)

RE1 schneidet an den Stellen 4, 7 und 11,

RE2 schneidet an den Stellen 5 und 10,

beide zusammen schneiden an den Stellen 4, 5, 7, 10 und 11.

0kB   5kb    10kb    15kb

|-------*--|----*-----|--*-------| nur RE1

|----------*----------*----------| nur RE2

|-------*--*----*-----*--*-------| beide zusammen

ΔRE1 = {4kb, 3kb, 4kb, 4kb}

ΔRE2 = {5kb, 5kb, 5kb}

ΔRE1RE2 = {4kb, 1kb, 2kb, 3kb, 1kb, 4kb}

Obwohl das Double-Digest-Problem NP-vollständig ist, eine Lösung nicht eindeutig sein muss und die Anzahl der Lösungen exponentiell wächst, ist es eine beliebte Kartierungsmethode, da die benötigten Experimente leicht durchführbar sind.